بررسی اثر پلیمر polyhema به عنوان بستر کشت سلولی بر روی رشد و تمایز سلول های پوششی رنگدانه دار شبکیه چشم انسان (rpe)

هدف:بافت پوششی رنگدانه دار شبکیه (rpe ) به صورت تک لایه بین فوتورسپتور ها و رگ های خونی قرار گرفته است. سلول های rpe نقش مهمی را در حفظ و نگهداری عملکرد نرمال شبکیه به عهده دارد. polyhema یک پلیمر هیدروفوب است که مانع از اتصال سلول های پستانداران بر سطح خود می شود. این پلیمر نرم و انعطاف پذیر جزء اصلی ساختار لنز های تماسی است. در مطالعه حاضر اثرپلیمر polyhema به عنوان بستر کشت سلولی بر روی رشد و تمایز سلول های پو ششی رنگدانه دار شبکه انسان بررسی شد. روش ها : سلول های rpe جداشده از کره های چشم اجساد انسانی در سنین جنینی تا نوزادی زیر سه سال (که بیش از 24 ساعت از زمان مرگ آن ها نگذشته بود ) از بانک چشم جمهوری اسلامی ایران تهیه شد و در محیط dmem/f12 غنی شده با 10% سرم جنین گوساله (fbs ) کشت داده شدند .پلیمر polyhema در اتانل 95% تهیه شد (mg/ml 12)، اجازه داده شد تا در زیر هود بیولوژیک خشک شود بعد از استریل شدن با uv ، سطح پلیمر با pbs شسته شد . سلول های rpe در پاساژ 2-5 بر روی سطوح کشت کوت شده با پلیمر و سطوح کشت پلی استیرن ( به عنوان کنترل )در ظروف کشت 24 خانه تحت سه محیط dmem/f12, dmem/f12+10%fbs , dmem/f12+30%afکشت شدند. مورفولوژی سلول های rpe کشت شده بر روی پلیمر در یک دوره زمانی مشخص بررسی شد . سرعت تکثیر و مرگ سلولی توسط الیزا بررسی شد . از تست mtt برای بررسی تعداد سلول های زنده استفاده شد .بررسی مارکر های سلول های rpe و مارکر های سلول های پروژنیتور – عصبی به وسیله تکنیک ایمونوسیتوشیمی انجام شد . استخراج rna از نمونه های کشت شده بر روی پلیمر و پلی استیرن انجام شد و به دنبال ساخت cdna بررسی مارکر های سلول های rpe ، مارکر های سلول های شبکیه و مارکر های سلول های پروژنیتوری –عصبی توسط تکنیک real time pcr بررسی شد. نتایج :نتایج نشان می دهند که سلول های کشت شده بر روی پلیمر تشکیل تعداد زیادی کلنی می دهند که با گذشت زمان کلنی ها به یکدیگر متصل شده و تشکیل کلنی واحد بزرگی را می دهد.کلنی های پیگمانته توانای بازیابی در محیط پلی استیرن را دارند.تعداد سلول های زنده بر روی سطح پلیمر و پلی استیرن مشابه و مرگ سلولی بر روی پلیمر وپلی استیرن قابل چشم پوشی است اما تکثیر سلولی در نمونه های پلیمر خیلی کمتر از پلی استیرن است.بیان مارکر های سلول های rpe و سلول های پروژنیتوری – عصبی توسط icc شناسای شد وبیان مارکر های سلول های rpe ، سلول های شبکیه و سلول های پروژنیتوری – عصبی توسط real time pcr محاسبه گردید. بحث و نتیجه گیری : polyhema یک پلیمر هیدروفوب غیر چسبنده است . وقتی سلول های rpe بر روی پلیمر کشت می شوند قادر به چسبیدن به سطح پلیت سلولی نیستند بنابر این به یکدیگر متصل می شوند و تشکیل تعداد زیادی کلنی می دهند .بعد از دو روز ، کلنی ها به شدت بزرگ و پیگمانته می شوند . بازبابی کلنی ها در سطح پلی استیرن، کشت تک لایه ای را حاصل می کند . پلیمر، القا کننده مرگ سلولی در سلول های rpe نبوده است و تکثیر نیز صورت نمی گیردبه نظر می رسد کشت سلول ها بر روی پلیمر، سلول ها را در فاز g0 قرار می دهد . بنابراین تکثیر سلولی کمتر از کنترل است . داده های ارائه شده در این تحقیق نشان دادند که، بیان مارکرهای سلول rpe در نمونه های سلول های کشت شده برروی پلیمر حفظ ماهیت rpe توسط پلیمررا نشان می دهد و نیز بیان مارکر های سلول های پروژنیتوری در سلول های کشت شده بر روی پلیمر نشان می دهد که پلیمر polyhema به منظور حفظ و گسترش سلول های پروژنیتوری – عصبی مفید است.